Dados do Trabalho

Título

AVALIAÇAO DA SENSIBILIDADE DE DETECÇAO DO KIT QUANTIPLEX PRO NO LABORATORIO DE BIOLOGIA E DNA FORENSE - GO

Introdução

A quantificação de DNA humano em amostras forenses é crucial para a normalização do DNA antes da genotipagem por marcadores STR. Desta forma, os resultados de quantificação devem ser sensíveis o suficiente para orientar o analista para as melhores escolhas de decisão.

Objetivos

Avaliar a sensibilidade de detecção do kit Investigator® Quantiplex® PRO (QIAGEN®) no Laboratório de Biologia e DNA Forense (LBDF) da Polícia Científica de Goiás.

Parte experimental

Para a avaliação da sensibilidade de detecção do kit Quantiplex PRO (QIAGEN) no equipamento 7500 (Applied Biosystems) três amostras de sangue de origem conhecida foram extraídas em triplicata e quantificadas. A partir do resultado de quantificação obtido de cada réplica (n=9), foi realizada uma curva de diluição, de modo que, para cada réplica, fossem obtidas soluções com diversas concentrações no intervalo de 1 ng/µl a 0,0005 ng/µl. Após a diluição, cada solução foi quantificada novamente.

Resultados e Discussões

Procedimentos de quantificação com altos níveis de imprecisão e baixa acurácia podem levar a perda de tempo e recursos durante as etapas posteriores do exame de DNA. Para avaliar a precisão do sistema, foram comparadas a média e o desvio padrão dos valores obtidos para o alvo autossômico do kit (alvo menor - 91pb). A baixa variação dos valores obtidos indica uma boa precisão do kit Investigator® Quantiplex® PRO (QIAGEN®) na inferência da quantidade de DNA presente em uma solução.
Para avaliar a exatidão do sistema, avaliou-se a porcentagem de erro de cada réplica em relação à concentração esperada de acordo com a diluição realizada. Ao analisar a diferença entre as médias das porcentagens de erro, observa-se que as concentrações de 0,001ng/µl e 0,0005ng/µl apresentaram porcentagens de erro significativamente diferentes daquelas observadas nas demais concentrações. Os resultados mostram que a partir da concentração de 0,001ng/µl a porcentagem de erro tem um leve aumento. Isso indica que em concentrações menores que 0,001ng/µl aumenta-se a inexatidão do resultado obtido para este alvo.

Conclusões

A partir da validação da sensibilidade do kit Quantiplex®, a análise dos resultados da quantificação pelo (LBDF), tornou-se mais objetiva, precisa e segura, facilitando a tomada de decisão dos analistas.

Referências e agradecimentos

Referências bibliográficas
VRANEŠ M., et al. Development and validation of the Investigator® Quantiplex Pro Kit for qPCR-based examination of the quantity and quality of human DNA in forensic samples. Forensic Sci. Int.: Genetics Supplement Series. 6:e518-e519, 2017).

Palavras Chave

Quantificação, Validação, Confiabilidade

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