Dados do Trabalho

Título

ANÁLISE DE METABÓLITOS NÃO OXIDATIVOS DO ETANOL POR LC-MS/MS: AVALIAÇÃO EM VÍTIMAS DE TRAUMA

Fundamentação/ Introdução

É reconhecida a associação entre consumo de álcool e a ocorrência de trauma. O etilglicuronídeo (EtG) e etilsulfato (EtS) são metabólitos não oxidativos do etanol cujas concentrações sanguíneas indicam uso recente, com janela de detecção mais ampla que o etanol. Pelas baixas concentrações propõe-se uso de sistema de UPLC-/MS/MS para quantificação dos metabólitos em sangue, sendo complementares na avaliação do abuso de álcool.

Objetivos

Desenvolver e validar uma metodologia analítica para a quantificação de níveis sanguíneos de EtG e EtS por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a espectrometria de massas (UPLC-MS/MS).

Delineamento e Métodos

Trata-se de um estudo analítico. Precipitou-se as proteínas de 25 μl de sangue com 100 μl de acetonitrila com 0.1% ácido fosfórico e padrões internos EtG-d5 e EtS-d5 (0.5 ng/ml). Injetou-se extratos em sistema UPLC-MS/MS com coluna cromatográfica fluoro-fenil (2.1 x 100 mm, 1.7 μm) a 40 °C. As fases móveis foram: fase A água com 0.1% ácido fórmico e fase B acetonitrila. A condição inicial teve 5% de fase B até 0.5 minutos, alcançando 80% de fase B em 9 minutos e retornando a 5% em 10 minutos. Foi realizada ionização em electrospray no modo negativo, com transições para quantificação do EtG (m/z) 221 a 75 e EtS 125 a 80.1. O método foi validado os parâmetros: seletividade, linearidade, sensibilidade, precisão, exatidão, estabilidade, efeito matriz e rendimento da extração. Aplicou-se o método na determinação dos metabólitos em amostras de 28 vítimas de trauma com alcoolemia positiva medida por cromatografia a gás.

Resultados

O tempo de retenção do EtG e EtG-d5 foi 2.9 min e do EtS e EtS-d5 foi de 5.53 minutos, com corrida de 10 minutos. As curvas foram lineares entre 0.1 e 18 μg/mL para EtG e 0.02 a 6.0 μg/mL para EtS (r=0.99, seguindo modelo ponderal 1/x). O método foi específico, preciso e exato. Na aplicação clínica os metabólitos foram encontrados em 27 de 28 pacientes. As concentrações de EtG (0.4 a 29.6 μg/ml) e EtS (0.2 a 3.2 μg/ml) tiveram correlação significativa com a alcoolemia (r=0.771 e r=0.817, p<0.001). Os dados demonstram associação entre níveis dos metabólitos e alcoolemia em vítimas de trauma.

Conclusões/ Considerações Finais

Foi desenvolvido e validado método sensível e específico para análise de EtG e EtS em sangue empregando LC-MS/MS. A preparação das amostras foi simples e eficiente, com alta recuperação. O método mostrou adequado desempenho analítico na avaliação de consumo de álcool em vítimas de trauma.

Palavras-Chave

Etanol, validação, etilglicuronídeo, etilsulfato, UPLC-MS/MS.