Dados do Trabalho

Título

Polarização e a resposta inflamatória de macrófagos expostos a um hidrogel contendo medula espinal descelularizada

Fundamentação/ Introdução

Introdução: A engenharia de tecidos é um campo de estudo que busca promover a regeneração, remodelação e crescimento de um tecido danificado utilizando biomateriais, células e/ou moléculas bioativas. A Bioimpressão 3D é uma abordagem promissora nesse campo de estudo,pois permite a produção de biomateriais com uma estrutura tridimensional bem definida e uma composição de biotinta controlada. No entanto, o transplante de um material exógeno em um organismo pode gerar uma resposta inflamatória, comprometendo a integridade do material e aumentando o dano tecidual. Os macrófagos são células do sistema imune com papel central no processo inflamatório e quando expostos a um estímulo podem se polarizar em um fenótipo pró-inflamatório (M1) ou anti-inflamatório (M2).

Objetivos

Objetivo: Neste contexto, o objetivo do trabalho é analisar a polarização (M1 e M2) de macrófagos expostos a hidrogel contendo medula espinal descelularizada.

Delineamento e Métodos

Metodologia: Macrofagos da linhagem RAW 264.7 foram cultivado em contato com um hidrogel composto de alginato de sódio, gelatina e medula espinal descelularizada (MEDescel) de rato dissolvidos em solução salina para uma concentração final de 3%, 4% e 1,5%. A quantificação das citocinas pró inflamatórias IL-1ꞵ e IL-6 e anti inflamatória IL-10 foi realizado por ELISA de acordo com especificações do fabricante. A expressão de marcadores celulares relacionado aos fenótipos M1 e M2 foi avaliada por meio de citometria de fluxo. A quantificação de espécies reativas de oxigênio (EROs) foi feita pela oxidação de 2-7- diacetato de diclorofluoresceína (DCF-DA) e a viabilidade celular foi avaliada por ensaio MTT.

Resultados

Resultados: A quantificação das citocinas pró-inflamatórias indicou uma maior produção de IL-1ꞵ e IL-6 e IL-10 no grupo exposto ao hidrogel em relação ao controle. A análise da expressão de marcadores celulares indicou uma maior expresão de CD69 e CD11b nos grupos controle, de CD34 e CD4 no controle negativo e de MRC1 (CD206) no controle positivo. Os grupos expostos ao hidrogel apresentaram uma produção de EROs inferior ao controle, embora o ensaio MTT demonstre uma diminuição de viabilidade celular.

Conclusões/ Considerações Finais

Conclusão: Apesar de uma diminuição na viabilidade celular, o hidrogel não induz a produção de EROs, polarização dos macrófagos e resposta inflamatória.

Palavras-Chave

Inflamação; Espécies reativas de oxigênio; Polarização; Hidrogel; Macrófagos; Medula Espinal; Descelularização