I Congresso Sul Brasileiro de Biomedicina

Dados do Trabalho


Título

UTILIZAÇAO DA LEVEDURA PICHIA PASTORIS NO DESENVOLVIMENTO DE UM SISTEMA DE PRODUÇAO DE VIRUS-LIKE PARTICLES BASEADAS NAS PROTEINAS ESTRUTURAIS DO ZIKA VIRUS

Fundamentação/Introdução

O Zika vírus (ZIKV) é considerado um dos vírus emergentes mais importantes do mundo. Torna-se relevante o desenvolvimento de estudos empregados para o controle e combate do ZIKV, visto que, não se tem uma profilaxia consolidada disponível e seu grau patogênico é de caráter preocupante.

Objetivos

O estudo visou construir um cassete de expressão baseado nos genes estruturais do Zika vírus (C, M/prM, E), utilizando a levedura Pichia pastoris como sistema, e avaliar a produção das proteínas para o desenvolvimento subsequente de uma plataforma vacinal baseada em VLPs (partículas semelhante a vírus).

Delineamento e Métodos

O vetor de expressão pPGKΔ3 e o gene que codifica as proteínas estruturais foram digeridos com enzimas especificas, o que possibilitou a inserção do gene no vetor. Após o período de incubação, os plasmídeos resultantes da reação foram utilizados para transformar a bactéria Escherichia coli. Para confirmar a clonagem, foi realizada a extração do DNA plasmidial das colônias transformadas e digeridas. O produto da digestão foi submetido à corrida eletroforética em gel de agarose para verificar a presença do gene no vetor. A construção obtida foi utilizada para transformar a levedura Pichia pastoris, e os recombinantes obtidos foram destinados ao processo de indução, realizando a coleta de alíquotas nos tempos de 72 e 144 horas para posterior análise e avaliação da produção proteica das amostras, pelas etapas de precipitação e SDS-PAGE.

Resultados

A análise dos resultados da eletroforese confirmou a presença do gene indicado na banda correspondente ao seu tamanho. A análise do SDS-PAGE sugere a produção da poliproteína a partir das 72 horas de indução, porém com um maior rendimento no período de 144 horas. Os resultados obtidos são de caráter preliminar, sendo necessária a realização de Western blot para confirmação da proteína. Portanto, evidenciamos a viabilidade de Pichia pastoris como um sistema para expressão heteróloga das proteínas C, prM/M e E do ZIKV.

Conclusões/Considerações Finais

Embora a confirmação da proteína não esteja por encerrada, os resultados preliminares foram satisfatórios. Ademais a otimização dos procedimentos realizados podem proporcionar melhores rendimentos a pesquisa, como o manejo de cultivos em maior escala e realização da purificação da proteína de interesse. Além disso, o presente trabalho serve de base para o estabelecimento de estratégias de imunização contra o Zika vírus, tal como o de VLPs.

Palavras-chave

Clonagem. Expressão heteróloga. Levedura recombinante. Zika vírus.

Área

Tema livre

Instituições

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO - Pernambuco - Brasil

Autores

Larissa Silva de Macêdo, Anna Jéssica Duarte Silva, André Luíz Santos de Jesus, Lígia Rosa Sales Leal, Gabriel Henrique de Arruda Cardozo, Tiago Henrique dos Santos Souza, Antonio Carlos de Freitas