Dados do Trabalho

Título

UTILIZAÇAO DA LEVEDURA PICHIA PASTORIS NO DESENVOLVIMENTO DE UM SISTEMA DE PRODUÇAO DE VIRUS-LIKE PARTICLES BASEADAS NAS PROTEINAS ESTRUTURAIS DO ZIKA VIRUS

Fundamentação/Introdução

O Zika vírus (ZIKV) é considerado um dos vírus emergentes mais importantes do mundo. Torna-se relevante o desenvolvimento de estudos empregados para o controle e combate do ZIKV, visto que, não se tem uma profilaxia consolidada disponível e seu grau patogênico é de caráter preocupante.

Objetivos

O estudo visou construir um cassete de expressão baseado nos genes estruturais do Zika vírus (C, M/prM, E), utilizando a levedura Pichia pastoris como sistema, e avaliar a produção das proteínas para o desenvolvimento subsequente de uma plataforma vacinal baseada em VLPs (partículas semelhante a vírus).

Delineamento e Métodos

O vetor de expressão pPGKΔ3 e o gene que codifica as proteínas estruturais foram digeridos com enzimas especificas, o que possibilitou a inserção do gene no vetor. Após o período de incubação, os plasmídeos resultantes da reação foram utilizados para transformar a bactéria Escherichia coli. Para confirmar a clonagem, foi realizada a extração do DNA plasmidial das colônias transformadas e digeridas. O produto da digestão foi submetido à corrida eletroforética em gel de agarose para verificar a presença do gene no vetor. A construção obtida foi utilizada para transformar a levedura Pichia pastoris, e os recombinantes obtidos foram destinados ao processo de indução, realizando a coleta de alíquotas nos tempos de 72 e 144 horas para posterior análise e avaliação da produção proteica das amostras, pelas etapas de precipitação e SDS-PAGE.

Resultados

A análise dos resultados da eletroforese confirmou a presença do gene indicado na banda correspondente ao seu tamanho. A análise do SDS-PAGE sugere a produção da poliproteína a partir das 72 horas de indução, porém com um maior rendimento no período de 144 horas. Os resultados obtidos são de caráter preliminar, sendo necessária a realização de Western blot para confirmação da proteína. Portanto, evidenciamos a viabilidade de Pichia pastoris como um sistema para expressão heteróloga das proteínas C, prM/M e E do ZIKV.

Conclusões/Considerações Finais

Embora a confirmação da proteína não esteja por encerrada, os resultados preliminares foram satisfatórios. Ademais a otimização dos procedimentos realizados podem proporcionar melhores rendimentos a pesquisa, como o manejo de cultivos em maior escala e realização da purificação da proteína de interesse. Além disso, o presente trabalho serve de base para o estabelecimento de estratégias de imunização contra o Zika vírus, tal como o de VLPs.

Palavras-chave

Clonagem. Expressão heteróloga. Levedura recombinante. Zika vírus.