Dados do Trabalho

Título

ESTUDO PRELIMINAR PARA A OTIMIZAÇAO DAS CONDIÇOES DE EXTRAÇAO DE 11-NOR-9-CARBOXI-A-TETRAHIDROCANABINOL (THC-COOH) EM AMOSTRAS DE CABELO ATRAVES DO USO DE PONTEIRAS DE FASE REVERSA

Fundamentação/Introdução

O principal metabólito secundário do tetrahidrocanabinol (THC), o 11-Nor-9-carboxi-A-tetrahidrocanabinol (THC-COOH) em cabelo é importante para confirmação efetiva do uso da droga cannabis sativa, entretanto esta matriz exige uma extração otimizada devido a seu alto potencial de efeito matriz e pequena quantia de THC-COOH aderido aos fios.

Objetivos

Otimizar condições de extração do THC-COOH através do uso de ponteiras de fase reversa LC C18, através de um teste com diferentes meios de ressuspensão do extrato seco, visando uma melhor afinidade da solução e melhor adesão do analito nas fibras, objetivando uma maior purificação do extrato com consequente diminuição do efeito matriz.

Delineamento e Métodos

Para o procedimento de extração foram utilizadas 30 mg de cabelo positivo para THC cortado em pequenos fragmentos, foi utilizado o padrão interno (PI) THC-COOH-D3. Para a hidrólise capilar foi adicionado 1 mL de NaOH 1M seguido de banho fervente. Após resfriamento espontâneo a temperatura ambiente, os tubos foram cobertos com alumínio e foi adicionado ácido acético glacial para atingir um pH ácido. Para a extração líquido-líquido foram adicionados 3 mL de n-hexano:acetato de etila (9:1), agitados em homogeneizador orbital. Foram retirados 2600 mL da fase orgânica em novo eppendorf, a qual foi evaporada a 60°C. A partir daí as amostras foram ressuspendidas com 300 µL de quatro soluções distintas, associando tampão fosfato, metanol (MEOH) e dois pHs diferentes: experimento 1: 100% tampão fosfato pH 6; 2: 90% tampão fosfato pH 6 10% MEOH; 3: 80% tampão fosfato pH 6 20% MEOH; 4: 100% tampão fosfato pH 8. Após o condicionamento das ponteiras C18, foram colocadas em eppendorfs de 1,5 mL com as amostras ressuspendidas, foram agitados em multivórtex por 20 minutos, com posterior eluição em vials com insert com metanol alcalino por mais 60 minutos. Então o extrato foi injetado em LC-MS/MS.

Resultados

O teste de ressuspensão foi avaliado através da área obtida do analito THC-COOH, obtendo-se o respectivo percentual de recuperação de cada experimento: Experimento 1: 95%; 2: 79%; 3: 84%; 4: 78%. Sendo assim, observou-se que experimento 1, o qual utilizou o tampão fosfato pH 6, foi a solução que proporcionou uma melhor eficiência da extração do analito THC-COOH nas ponteiras de fase reversa C18.

Conclusões/Considerações Finais

O protocolo será utilizado no desenvolvimento de metodologia analítica para análise toxicológica de ampla janela de detecção para o uso de maconha em amostras de cabelo.

Palavras-chave

Cabelo, Tetrahidrocanabinol (THC), 11-Nor-9-carboxi-A-tetrahidrocanabinol (THC-COOH)