Dados do Trabalho

Título

PRODUÇAO DE HIDROGEL DE MEDULA ESPINAL DESCELULARIZADA PARA TRATAMENTO DE LESOES NA MEDULA ESPINAL

Fundamentação/Introdução

A lesão da medula espinal (LME) é uma síndrome neurológica debilitante que afeta a qualidade de vida do acometido. O paciente que apresenta um quadro LME não tem uma perspectiva de cura e, por isso, novas abordagens estão sendo investigadas. Nesse cenário, o uso de biomateriais é uma possível forma de a recuperação do paciente.

Objetivos

O presente estudo experimental objetivou a produção e padronização de um hidrogel, utilizando a medula espinal descelularizada de ratos para futuro uso no tratamento de LME.

Delineamento e Métodos

Cortes de medulas espinais dos animais (N=6) com segmentos de 1 cm foram submetidos ao processo de descelularização, avaliando-se dois parâmetros: concentração do detergente e tempo de processamento. O detergente Sulfato Dodecil de Sódio (SDS) foi utilizado nas concentrações de 0,5%, 1% e 5% e o tempo total do processo foi realizado em 9, 12 ou 18 horas, variando o tempo de exposição das amostras a cada solução. A variação do tempo de exposição foi realizada com a concentração de 1% de SDS. Para a comprovação do processo de descelularização, o conteúdo de DNA das amostras foi quantificado utilizando o equipamento NanoDrop 2000- Thermo Fischer Scientific. Lâminas histológicas das amostras foram marcadas com DAPI e analisadas em microscópio de fluorescência ou coradas com eosina e hematoxilina. Após a determinação da melhor concentração de SDS e o tempo ideal de descelularização, as amostras de medula foram digeridas com pepsina diluída em HCl 0,1 M para a formação do hidrogel.

Resultados

A quantificação de DNA indicou menor concentração de DNA quando utilizada a concentração de 1% SDS e o tempo ideal do processo de 9 horas, apresentando 19.026,40 ng de DNA/mg de tecido, enquanto o tecido controle apresentou 194.734,38 ng de DNA/mg de tecido. As lâminas marcadas com DAPI apresentaram núcleos evidentes apenas na concentração de 0,5% SDS. A coloração com eosina e hematoxilina indicou a presença de poucas células após o término do processo. Após o tratamento com pepsina, foi produzido um hidrogel com alta viscosidade.

Conclusões/Considerações Finais

Os resultados obtidos sugerem que a concentração ideal de SDS para a realização da descelularização da medula é a de 1% de detergente e o melhor tempo para o processo é de 9 horas. Além disso, foi possível a produção de um hidrogel de tecido descelularizado utilizando pepsina.