Dados do Trabalho

Título

O TREINAMENTO DO BIOMEDICO EM PROCEDIMENTOS DE ISOLAMENTO DE DNA: POR QUE ISSO IMPORTA?

Fundamentação/Introdução

Diversas técnicas de análise molecular estão disponíveis para a detecção da variabilidade genética ao nível de DNA, para isso, é necessário que o material genético a ser utilizado seja de ótima qualidade. Por isso, o treinamento específico e aprofundado em um destes procedimentos, como é o caso da extração de DNA, é essencial, principalmente para espécies como Carpotroche brasiliensis, Plathymenia reticulata e Eschweilera ovata que possuem propriedades medicinais e socioeconômicas a serem elucidadas.

Objetivos

* Conhecer diferentes técnicas de isolamento de DNA, e a função de cada componente do protocolo;
* Verificar a eficiência de 2 protocolos de extração de DNA para as espécies selecionadas;
* Comparar a qualidade do DNA adquirido das espécies selecionadas com diferentes protocolos.

Delineamento e Métodos

Para a extração de DNA foram aplicados os protocolos Doyle & Doyle, adaptado por Ferreira & Grattapaglia (protocolo 1) e o protocolo Inglis, Pappas & Grattapaglia (protocolo 2). As espécies utilizadas para o estudo quantitativo e qualitativo experimental foram C. brasiliensis, P. reticulata e E. ovata. Extraíram-se 20 amostras de cada espécie, sendo 10 para cada um dos protocolos.
Após as extrações, realizou-se eletroforese em gel de agarose com concentração 0,8% para análise do DNA extraído. Como marcador controle foi utilizado DNA de bacteriófago lambda na concentração de 20 ng/μL.

Resultados

O DNA das amostras resultantes do protocolo 1, apresentou-se como bandas fracas para as amostras de P. reticulata e bandas mais fortes para amostras C. brasiliensis e E. ovata, que representam poucas e grandes quantidades, respectivamente, de DNA extraído.
Nos resultados das amostras de DNA do protocolo 2, houve formação de bandas fortes em 7 de 10 amostras de P. reticulata, 8 de 10 amostras de C. brasiliensis e 6 de 10 amostras de E. ovata. Para estas últimas duas, as bandas são mais fracas em comparação com o protocolo 1.

Conclusões/Considerações Finais

Para obter DNA extraído de qualidade ótima, as espécies divergiram entre si. Para a espécie P. reticulata, é preferível a utilização do protocolo 2, visto que possui etapas extras de lavagem, enquanto para as espécies C. brasiliensis e E. ovata é recomendado a utilização do protocolo 1.
Conclui-se que o conhecimento sobre as funções dos reagentes e etapas metodológicas são fundamentais para que o profissional possa resolver problemas práticos e tomar decisões durante a rotina de um laboratório.

Referências

1. COSTA, M.R.; MOURA, E.F. Manual De Extração De Dna. Belém: Ernbrapa Amazônia Oriental, 2001.

2. CARVALHO, P.E.R; Vinhático Plathymenia reticulata. Colombo: Embrapa Florestas, 2009. 11p. (Comunicado Técnico, 231).

3. FERREIRA, B.S.B; Atividades Antioxidante E Antimicrobiana De Extratos Hidroalcoólicos De Espécies Vegetais Do Semiárido. Montes Claros, MG. Unimontes, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas/PPGCB, 2016.

4. FERREIRA, M. E.; GRATTAPAGLIA, D. Introdução ao Uso de Marcadores Moleculares em Análise Genética. 3ed. Brasília: EMBRAPA-CENARGEN, 1998.

5. INGLIS, P.W.; PAPPAS, M.C.R.; GRATTAPAGLIA, D. Protocolo de Extração de DNA e RNA de Alta Qualidade para Espécies Ricas em Compostos Secundários. Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2016. 5p. (Comunicado Técnico, 204).

Palavras-chave

protocolo extração de DNA; treinamento laboratorial; biologia molecular