Dados do Trabalho

Título

Avaliação por microscopia confocal da edocitose de vesículas extracelulares de células tronco adipoderivadas (ADSCs) em cérebros de ratos com AVC isquêmico.

Fundamentação/Introdução

O acidente vascular cerebral (AVC) é uma das principais causas de morte no mundo. Pesquisas revelam que o uso de vesículas extracelulares (VEs) tem apresentado resultados promissores no tratamento de tecido cerebral infartado e possuem capacidade de passar pela barreira hematoencefálica.

Objetivos

Comprovar a incorporação das VEs pelas células do tecido nervoso;
Observar se neurônios são capazes de endocitar VEs e em quais regiões celulares elas são encontradas.

Delineamento e Métodos

Foram utilizadas VEs de células tronco adipoderivadas (LONZA) em cultura e previamente isoladas por centrifugações diferenciais. A concentração de VEs foi feita por dosagem de proteínas através de kit de ensaio de proteína BCA. Os animais tratados foram ratos adultos Wistar (CEUA31888) com isquemia induzida por termocoagulação. 24 horas depois foram tratados via intranasal com 200µg/kg de VEs coradas com PKH26-Mini (Sigma). 18h após o tratamento, os animais foram anestesiados e sofreram perfusão transcardíaca (tampão fosfato-salino seguido de paraformaldeído 4%). Foram realizados cortes coronais dos cérebros no vibrátomo em fatias de 20µm. Os núcleos foram corados com HOECHST para análise quantitativa (n=3). Foi realizado imunohistoquímica para marcação de neurônios usando anticorpo primário NEUn e anticorpo secundário Alexafluor488 para análise qualitativa. As lâminas foram observadas em microscópio confocal espectral FV1000 em aumento de 60x. Na análise quantitativa, foi utilizado teste T não pareado.

Resultados

A análise das lâminas no microscópio confocal confirmou a endocitose das VEs pelas células do tecido nervoso, assim como mostrou a localização das VEs na região perinuclear.18h após o tratamento, tanto o lado ipsi-lateral, na região da zona de penumbra, como contra-lateral, apresentaram número semelhante de núcleos marcados e porcentagem de núcleos com vesículas. A reconstrução tridimensional ainda demonstrou que as VEs foram endocitadas pelos neurônios por nós observados.

Conclusões/Considerações Finais

Nosso trabalho confirmou que as VEs conseguem alcançar a região lesionada do tecido e sua localização perinuclear está de acordo com os dados da literatura. A endocitose por neurônios mostra que o tratamento pode ser promissor na recuperação das funções neuronais. Ademais, também foi demonstrado que as VEs são eficientes em ultrapassar a barreira hematoencefálica, o que as torna alternativas viáveis para a recuperação de indivíduos afetados por AVC isquêmico.

Palavras-chave

Acidente vascular cerebral; vesículas extracelulares; endocitose; neurônios.