Dados do Trabalho

Título

DESENVOLVIMENTO DE CULTURA PRIMARIA A PARTIR DE BULBO CAPILAR HUMANO.

Fundamentação/Introdução

Ensaios farmacológicos experimentais ou ensaios microbiológicos, são de suma importância, entretanto, muitos desses ensaios são in vivo, dificultando o seu desenvolvimento. A cultura celular in vitro apresenta várias vantagens como menor tempo e gasto e resultados fidedignos quando comparados aos ensaios in vivo. A utilização do cultivo primário, como os queratinócitos, muitas das características de origem são preservadas, provendo assim, resultados mais próximos do fisiológico do tecido original. Na constituição celular da epiderme, os queratinócitos tem como principal função a renovação epitelial, sendo o bulbo capilar uma fonte constante de queratinócitos germinativos.

Objetivos

Realizar o cultivo de queratinócitos de origem primária a partir de bulbo capilar humano com o intuito de padronizar metodologia de coleta e processamento para realização de estudos farmacológicos e microbiológicos.

Delineamento e Métodos

Após a extração dos bulbos, coletados de voluntários, estes foram acondicionados em um tubo contendo uma solução tampão fosfato-salina suplementada com antimicrobianos. A amostra foi centrifugada, ressuspensa em tripsina e incubada a 37 ˚C durante 5 min. Após a obtenção dos queratinócitos, estes foram lavados e ressuspensos em Meio de cultivo Modificado de Eagle (DMEM) suplementado com antimicrobianos. As células foram mantidas em placa de 24 poços a 37˚C com 5% de CO2. A cada 72 horas foram observadas as células e o meio de cultivo trocado. Após a confluência dos queratinócitos de 80%, foi realizado a primeira passagem e assim sucessivamente até a inviabilização dos queratinócitos em cultivo in vitro. Sendo sua morfologia acompanhada diariamente por microscopia.

Resultados

Foi possível isolar e cultivar os queratinócitos com diferenciação morfológica e células ativas em 8 dias. Após a diferenciação celular, os queratinócitos foram confirmados pelo aspecto cubóides arredondados e poligonais achatados. A confluência celular foi presenciada no 12º dia. Após o procedimento de passagem foi observado baixo crescimento e decaimento exponencial da viabilidade celular com presença de botões apoptóticos, inviabilizando o cultivo celular dos queratinócitos no 15º dia.

Conclusões/Considerações Finais

Foi estabelecido o cultivo de queratinócitos de origem primária a partir de bulbo capilar humano a fim de disponibilizar para estudos farmacológicos e microbiológicos in vitro.

Referências

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Palavras-chave

cultura de queratinócitos humanos; monocultura; queratinócitos primário.