Dados do Trabalho

Título

ENSAIOS COM TIOFLAVINA S SUGEREM A PRESENÇA DE ESTRUTURAS SEMELHANTES A AMILOIDES NO PROTISTA TRICHOMONAS VAGINALIS

Fundamentação/Introdução

Para que ocorra a infecção com Trichomonas vaginalis, protista causador da tricomoníase humana, é necessário a adesão do parasito sobre as células hospedeiras. Estudos sobre amiloides funcionais, agregados proteicos fibrilares ricos em fitas-β, em microrganismos são importantes devido ao papel dessas fibras como fatores de citoaderência para o estabelecimento de patógenos nos hospedeiros.

Objetivos

Investigar se estruturas semelhantes a amiloides seriam encontradas em T. vaginalis.

Delineamento e Métodos

Neste estudo experimental foram utilizados ensaios com tioflavina S (ThS), um marcador fluorescente específico para fibras amiloides. Foram usadas duas cepas de parasitos (Jt e FMV1) mantidas em cultura com meio TYM (Triptona – Extrato de Levedura – Maltose) contendo soro fetal bovino por 48 horas à 37ºC. As amostras foram divididas em dois grupos: (1) não permeabilizadas e (2) permeabilizadas com Triton X-100 por 10 minutos a temperatura ambiente. Em seguida os parasitos foram incubados com duas concentrações de ThS (0.05% e 0.5%). Após a incubação, as células foram observadas no microscópio de fluorescência (λ=531nm).

Resultados

Os resultados demonstraram uma intensa marcação de ThS na superfície celular e em estruturas citosólicas pontuais distribuídas nos parasitos da cepa FMV1. Estas estruturas pontuais poderiam corresponder aos hidrogenossomos, organelas de origem endossimbiótica relacionada às mitocôndrias, produtoras de ATP e de hidrogênio molecular. Inicialmente, foi utilizada a concentração de 0.05% ThS para as duas cepas, porém os parasitos da cepa JT, menos citoaderentes, não exibiram marcação nessa concentração. Aumentamos então a concentração do marcador em dez vezes para a cepa JT. Desta forma, os resultados revelaram um perfil de marcação, semelhante à cepa FMV1. Nas amostras permeabilizadas com Triton X-100 foram também observadas marcação positiva de ThS na membrana e em estruturas citosólicas pontuais do parasito. T. vaginalis pode formar agregados celulares entre si, sendo isso relacionado com o aumento da sua virulência. Desse modo, verificamos um aumento da marcação de ThS na presença dos agregados parasito-parasito.

Conclusões/Considerações Finais

Portanto, T. vaginalis apresentou uma marcação positiva para amiloides. Estudos estão em andamento para melhor caracterizar a presença de amiloides no parasito e determinar se estes agregados proteicos poderiam influenciar nos mecanismos de interação com o hospedeiro.

Palavras-chave

Adesão; amiloides funcionais; ensaio com tioflavina S; tricomoníase.