Dados do Trabalho

Título

ANALISE COMPARATIVA DA QPCR-DUPLEX ITS COMO FORMA DE DIAGNOSTICO EM DIFERENTES ESPECIMES CLINICOS DE PACIENTES COM LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA PROVENIENTES DO ESTADO DE PERNAMBUCO E AMAZONAS

Fundamentação/Introdução

Na Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), o diagnóstico por PCR quantitativa em tempo real (qPCR) apresenta um aumento da sensibilidade, especificidade e rapidez nos resultados, contribuindo para detecção/quantificação do DNA do parasita.

Objetivos

Assim, objetivou-se comparar a qPCR-duplex ITS, desenvolvida pela equipe, em amostras de sangue, biópsia e imprint de lesão de pacientes com LTA, provenientes da Fundação de Medicina Tropical do Amazonas (AM) e Postos de saúde e Serviço de Referência em Leishmaniose de Pernambuco (PE) entre os anos de 2015 e 2018.

Delineamento e Métodos

Os pacientes participantes foram diagnosticados com LTA a partir de critérios clínicos, epidemiológicos e laboratoriais. Foram obtidas amostras de sangue periférico, biópsia e imprint de lesão para o estudo experimental. O DNA dos espécimes clínicos foi extraído utilizando um kit comercial. A qPCR-duplex, utilizando o alvo ITS1, foi desenvolvida para detectar, quantificar e identificar espécies de Leishmania do subgênero Viannia (SSV) e a espécie L. (Leishmania) amazonensis (SLa).

Resultados

Obteve-se um total de 213 (92 PE; 121 AM) pacientes, sendo 101 (50 PE; 51 AM) amostras de sangue, 33 de biópsia (33 PE) e 124 de imprint (44 PE; 80 AM). Das amostras de sangue, 5,94%(6/101) foram positivas apenas para o SSV com média de Carga Parasitária (CP) 476,02fg/µL, 2,97%(3/101) foram positivas apenas para o SLa com média de CP 388,87fg/µL e 2,97%(3/101) foram positivas para o SSV e SLa com média de CP 272,13fg/µL e 60,20fg/µL, respectivamente. Das biópsias, 63,63%(21/33) foram positivas apenas para o SSV com média de CP de 1.645.152,37fg/µL, 9,09%(3/33) foram positivas para o SSV e SLa com média de CP 11.703,07fg/µL e CP 82,32fg/µL, respectivamente. Dos imprints, 79,83%(99/124) foram positivas apenas para o SSV com média de CP 276.831,73fg/µL, 1,61%(2/124) foram positivos para o SLa com média de CP 514.038,35fg/µL e 1,61(2/124) positivos para o SSV e SLa com média de CP 11.801,72 e 794,96fg/µL, respectivamente.

Conclusões/Considerações Finais

Observou-se após análise uma maior sensibilidade do teste em imprints quando comparados às biópsias e sangue. O imprint de lesão é uma amostra menos invasiva, além de obtenção simples e rápida. Por apresentar baixa parasitemia, o teste em sangue não foi promissor no diagnóstico da LTA. Assim, estes dados servirão de base para determinação da acurácia da qPCR duplex ITS e possível implementação futura deste espécime para o diagnóstico molecular da LTA.

Palavras-chave

Leishmaniose Tegumentar Americana; espécimes clínicos; diagnóstico; qPCR-duplex ITS.